南京邦道企業(yè)管理咨詢有限公司

5.3.5實驗室管理者應(yīng)確保由經(jīng)過培訓(xùn)合格的人員使用適當(dāng)?shù)膫€人防護(hù)裝備和設(shè) 備處理危險廢棄物或委托具有資質(zhì)的專業(yè)機(jī)構(gòu)統(tǒng)一處理。污染物的最終棄置應(yīng)符 合國家（國際）環(huán)境或健康安全規(guī)則。

5.4檢測和校準(zhǔn)方法及方法的確認(rèn) 5.4.4當(dāng)實驗室采用從知名的技術(shù)組織或有關(guān)科學(xué)書籍和期刊公布的，或由設(shè)備 制造商指定的方法，實驗室應(yīng)制定相應(yīng)的非標(biāo)方法，并進(jìn)行方法確認(rèn)。 非標(biāo)方法的制定應(yīng)滿足GB/T20001.4的要求，方法中至少應(yīng)包含下列信息： a)方法的適用范圍； b)被檢測樣品類型的描述和處理； c)所需基因擴(kuò)增的儀器和設(shè)備，包括技術(shù)性要求； d)試劑和材料，包括所需的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)； e)基因擴(kuò)增方法的描述（包括引物、探針的序列信息）； f)質(zhì)量控制方法的描述（如檢測對照的設(shè)置及結(jié)果分析）； g)結(jié)果判定和表述； h)方法的檢測限。 5.4.5方法的確認(rèn) 實驗室制定的非標(biāo)準(zhǔn)方法在引入檢測前應(yīng)進(jìn)行方法確認(rèn)。

確認(rèn)方法可采用實 驗室內(nèi)及實驗室間的比對試驗。基因擴(kuò)增非標(biāo)準(zhǔn)方法的確認(rèn)技術(shù)指標(biāo)至少應(yīng)包括以下幾個方面： a)靈敏度。可通過量化樣品中被分析物的最小檢測量來評估； b)特異性?？赏ㄟ^分析相關(guān)基因進(jìn)行評估，主要考慮方法的選擇性、排他 性和涵蓋性； c)重復(fù)性。可通過同一實驗室在相同條件下的組內(nèi)重復(fù)和組間重復(fù)來評估。 d)再現(xiàn)性。

至少需要3個實驗室測試同一組樣品來評估。 實驗室應(yīng)記錄確認(rèn)過程中所使用的程序、所獲得的結(jié)果，并對該方法是否適 合預(yù)期用途作出評價。 5.4.6測量不確定度的評定 5.4.6.2必要時，實驗室應(yīng)對基因擴(kuò)增檢測結(jié)果進(jìn)行測量不確定度評定，找出不 確定度的所有分量且做出合理評定（如，樣品質(zhì)量、引物及探針的質(zhì)量、目標(biāo)序 列長度、檢測方法及儀器等）。

5.5.6基因擴(kuò)增檢測實驗室每個工作區(qū)域都應(yīng)配備專用的儀器設(shè)備，并有明確標(biāo) 識，避免不同區(qū)域內(nèi)的設(shè)備物品（如微量移液器）發(fā)生混淆或誤用。建議各工作 區(qū)內(nèi)配備可移動紫外燈對工作臺面、地面等進(jìn)行消毒。 5.6測量溯源性 5.6.3當(dāng)使用無證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（包括克隆目的基因的陽性質(zhì)粒、陽性核酸參考物質(zhì)） 不能進(jìn)行溯源時，實驗室應(yīng)盡量利用生產(chǎn)廠商提供的有效證明，進(jìn)行驗證試驗或 比對試驗，以確認(rèn)其有效濃度。 5.8測試和校準(zhǔn)物品的處置 可采?。ǖ幌抻冢┮韵麓胧┙档蛯嶒灅悠穼Y(jié)果的影響： a)器材專用，實現(xiàn)實驗樣品在試驗室工作區(qū)間的單向流動； b)做好技術(shù)人員的自身防護(hù)，如使用個人防護(hù)裝備，包括作業(yè)服、鞋套、 手套、口罩和發(fā)罩，盡可能一次性使用，并根據(jù)具體情況及時更換； c)做好設(shè)備、設(shè)施的定期清理和消毒； d)具備實驗區(qū)的外部屏障，能有效阻止無關(guān)人員未經(jīng)許可進(jìn)入實驗區(qū)； e)各功能區(qū)的空調(diào)、換氣系統(tǒng)獨(dú)立，進(jìn)氣與排氣通道不混用。

5.9檢測和校準(zhǔn)結(jié)果質(zhì)量的保證 5.9.1基于基因擴(kuò)增檢測方法結(jié)果的可靠性，每個基因擴(kuò)增檢測步驟均應(yīng)設(shè)置陽 性質(zhì)控對照、陰性質(zhì)控對照和空白質(zhì)控對照，當(dāng)一種對照達(dá)不到預(yù)期結(jié)果時，以 一定的時間間隔加入其它對照方法。 適用時，陽性對照可包括陽性提取對照、陽性目標(biāo)序列對照、弱陽性目標(biāo)序 列對照、抑制反應(yīng)陽性對照、方法陽性對照和基質(zhì)添加；陰性對照可包括實驗室 環(huán)境對照、核酸提取空白對照、基因擴(kuò)增試劑對照、陰性目標(biāo)序列對照和方法空 白對照。

本文件由中國合格評定國家認(rèn)可委員會(CNAS)制定，旨在指導(dǎo)化學(xué)分析實 驗室如何根據(jù)CNAS-CL01：2006和CNAS-CL10：2012的相關(guān)要求在內(nèi)部質(zhì)量 控制中運(yùn)用控制圖技術(shù)。 《CNAS-CL01：2006檢測和校準(zhǔn)實驗室能力認(rèn)可準(zhǔn)則》(ISO/IEC17025:2005) 第5.9條規(guī)定：實驗室應(yīng)有質(zhì)量控制程序以監(jiān)控檢測和校準(zhǔn)的有效性。所得數(shù)據(jù) 的記錄方式應(yīng)便于可發(fā)現(xiàn)其發(fā)展趨勢，如可行，應(yīng)采用統(tǒng)計技術(shù)對結(jié)果進(jìn)行審查。 

這種監(jiān)控應(yīng)有計劃并加以評審，可包括……定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(參考物質(zhì))進(jìn) 行監(jiān)控和/或使用次級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(參考物質(zhì))開展內(nèi)部質(zhì)量控制……應(yīng)分析質(zhì)量控 制的數(shù)據(jù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)質(zhì)量控制數(shù)據(jù)將要超出預(yù)先確定的判據(jù)時，應(yīng)采取有計劃的措 施來糾正出現(xiàn)的問題，并防止報告錯誤的結(jié)果。 《CNAS-CL10：2012檢測和校準(zhǔn)實驗室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在化學(xué)檢測領(lǐng)域的應(yīng) 用說明》第5.9a)條規(guī)定：實驗室應(yīng)建立和實施充分的內(nèi)部質(zhì)量控制計劃，以確 保并證明檢測過程受控以及檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

質(zhì)量控制計劃應(yīng)包括空 白分析、重復(fù)檢測、比對、加標(biāo)和控制樣品的分析，計劃中還應(yīng)包括內(nèi)部質(zhì)量控 制頻率、規(guī)定限值和超出規(guī)定限值時采取的措施……適用時，實驗室應(yīng)使用控制 圖監(jiān)控實驗室能力。質(zhì)量控制圖和警戒限應(yīng)基于統(tǒng)計原理。實驗室也應(yīng)觀察和分 析控制圖顯示的異常趨勢，必要時采取處理措施。 

本文件主要參照北歐創(chuàng)新中心的技術(shù)報告[1]、國際理論與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會 (IUPAC)的技術(shù)報告[2]和國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)的技術(shù)規(guī)范[3]編制