廣州輝駿生物科技股份有限公司

一、逆轉(zhuǎn)錄病毒服務(wù)簡介逆轉(zhuǎn)錄病毒是一種RNA病毒，其最基本特征是：在生命過程中，該病毒有一個從RNA到DNA的逆轉(zhuǎn)錄過程。逆轉(zhuǎn)錄病毒在感染宿主細(xì)胞時，會將自身基因組及其攜帶的外源基因整合入宿主基因組中，因此可以介導(dǎo)外源基因穩(wěn)定、長期的表達。逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA的整合是病毒RNA復(fù)制的必經(jīng)階段。只有當(dāng)受感染的細(xì)胞處于細(xì)胞分裂期時，逆轉(zhuǎn)錄病毒的DNA基因組才能接觸到宿主細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)。因此，逆轉(zhuǎn)錄病毒只能在分裂中的細(xì)胞中復(fù)制。輝駿生物使用的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體基于莫洛尼鼠白血病病毒(MMLV)，其基本骨架是pMXs，并帶有多種可選的篩選標(biāo)記。逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞為Plat-E，其內(nèi)含有病毒包裝組分，因此只需轉(zhuǎn)入單一的病毒表達載體即可包裝出攜帶外源基因的病毒顆粒，操作更加方便。但是需要注意的是，Plat-E包裝出的逆轉(zhuǎn)錄病毒只能感染攜帶Slc7a受體的細(xì)胞，因此僅適用于大鼠、小鼠的細(xì)胞系；若宿主細(xì)胞為其它物種的細(xì)胞，則需要首先用攜帶Slc7a受體基因的病毒感染該細(xì)胞系，使其攜帶Slc7a受體，然后再用帶有外源目的基因的病毒感染相應(yīng)細(xì)胞系。 二、逆轉(zhuǎn)錄病毒表達系統(tǒng)的特點1>能將外源基因有效地整合入宿主染色體上，介導(dǎo)目的基因穩(wěn)定、長期的表達；2>轉(zhuǎn)染效率高，目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組內(nèi)的幾率大大增加；3>可用于基因的過表達，誘導(dǎo)產(chǎn)生多潛能干(iPS)細(xì)胞系；4>建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的時間較常規(guī)真核表達載體更短，能大大縮短實驗周期、提高實驗效率。 三、逆轉(zhuǎn)錄病毒服務(wù)整體流程A.逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建：將目的基因片段連接至逆轉(zhuǎn)錄病毒載體；B.逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝：重組病毒質(zhì)粒直接轉(zhuǎn)染Plat-E細(xì)胞進行病毒包裝，收集富含逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒的細(xì)胞上清液，濃縮后進行滴度測試，得到滴度為1×10⁶~1×10⁷ TU/mL的逆轉(zhuǎn)錄病毒液；C.穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的建立：分別使用實驗組和對照組逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細(xì)胞，利用抗生素初步篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，細(xì)胞分選得到單克隆細(xì)胞株，建立實驗組和對照組的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。                                                                 圖1逆轉(zhuǎn)錄病毒技術(shù)服務(wù)整體流程   四、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體元件    輝駿生物的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體如下，另外，客戶還可根據(jù)需要更換啟動子，熒光基因或抗性基因。                                  
                                                         圖2逆轉(zhuǎn)錄病毒載體元件示意圖 五、逆轉(zhuǎn)錄病毒技術(shù)服務(wù)項目 表1 逆轉(zhuǎn)錄病毒服務(wù)項目及內(nèi)容分類服務(wù)編號項目名稱客戶提供服務(wù)描述基因過表達逆轉(zhuǎn)錄病毒服務(wù)FG301基因過表達逆轉(zhuǎn)錄病毒構(gòu)建目標(biāo)基因的模板構(gòu)建載體FG302基因過表達逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝套餐目標(biāo)基因的模板(1)構(gòu)建載體(2)逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝FG303過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建套餐目標(biāo)基因的模板(1)構(gòu)建載體(2)逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝(3)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 特別提醒：（1）基因過表達逆轉(zhuǎn)錄病毒服務(wù)適用于目標(biāo)基因長度為2000bp以下的片段，2000bp以上的請具體咨詢；（2）我公司亦可進行基因釣取和WB檢測服務(wù)，但費用不包含在總套餐之內(nèi)，需根據(jù)實際情況收費；（3）我公司一般提供的病毒滴度在1×10⁶~1×10⁷ TU/mL之間，規(guī)格為1mL；（4）Plat-E包裝出的逆轉(zhuǎn)錄病毒只能感染攜帶Slc7a受體的細(xì)胞，因此只適用于大鼠、小鼠的細(xì)胞系。 六、實驗結(jié)果提交實驗結(jié)束后，我公司會提交完整的實驗結(jié)果，包括：1.客戶定制的相應(yīng)載體、病毒液或穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株；2.逆轉(zhuǎn)錄病毒液滴度測定報告單；3.逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的測序結(jié)果和峰圖、引物序列、載體圖譜；4.全部實驗圖片；5.詳細(xì)實驗報告。 

七、實驗周期及收費標(biāo)準(zhǔn)：咨詢本公司