在HILIC色譜柱上,物質(zhì)的洗脫順序與反相色譜恰恰相反,在反相柱上很難保留或根本不保留的物質(zhì),在通常的實(shí)驗(yàn)條件下,它們?cè)贖ILIC柱上有較強(qiáng)的保留。
HILIC色譜柱鍵合技術(shù)通過(guò)高鍵合致密度和被調(diào)整的均勻度提供了極高的表面覆蓋率。均一性越好,硅膠基質(zhì)周圍形成的“疏水保護(hù)層”惰性就更強(qiáng)。如此得到了pH穩(wěn)定性高、重現(xiàn)性好的硅醇基完全失活的鍵合相。HILIC色譜柱用的超親水性的填料。和對(duì)未修飾的硅膠進(jìn)行填充的硅膠色譜柱相比,PC HILIC的親水性更強(qiáng),對(duì)極性化合物如核算堿基的保留更大。
1. 對(duì)極性化合物的保留強(qiáng)。
2. 高的理論塔板數(shù)。
3. 堿性化合物峰形對(duì)稱且尖銳。
4. 適合LC-MS分析。
HILIC色譜柱活動(dòng)相的配制:
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求活動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
a、活動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保存在柱中)。
b、活動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c、活動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用進(jìn)步溫度的方法降低活動(dòng)相的黏度)。
HILIC色譜柱
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